Kehidupan tanpa pemilihan: baik atau bahaya?

Kehidupan tanpa pemilihan: baik atau bahaya?

Alexey Kondrashov, Nadezhda Markina
"Trinity Option" No. 23 (117), 20 November 2012

Alexey Kondrashov

Seseorang dalam masyarakat yang bertamadun hidup lebih dan lebih sosial dan lebih kurang dan secara biologi. Dia berjaya mengatasi batasan-batasan yang sifatnya telah dikenakan ke atasnya: dia tinggal di mana-mana iklim, dia menguasai sumber makanan baru, telah belajar untuk memerangi penyakit berjangkit. Ramai faktor yang sebelum ini telah membunuh seorang manusia, kini tidak lagi menjadi maut untuknya. Doktor telah belajar bagaimana untuk menjaga bayi yang baru lahir dan lemah; vaksin melindungi daripada jangkitan berbahaya, dan dalam kes jangkitan dengan antibiotik melawan jangkitan; masyarakat merawat orang sakit dan orang cacat. Walaupun semua ini berfungsi dengan sempurna, tamadun secara radikal telah meningkatkan keupayaan penyesuaian biologi seseorang – kelangsungan hidupnya di alam sekitar. Tetapi manusia tidak dapat menjauhkan diri dari genetiknya, dan kita tidak boleh mengubah proses yang berlaku di bawah syarat-syarat ini. Untuk memahami apa yang berlaku dengan manusia hari ini dan apa yang menanti kita pada masa akan datang, kita telah cuba dengan bantuan ahli biologi evolusi, doktor sains biologi Alexey Kondrashov, seorang profesor di University of Michigan dan Fakulti Bioengineering dan Bioinformatika Universiti Negeri Moscow, yang memberi kuliah umum di Festival Sains All-Russian 2012.

Dari segi biologi evolusi, pemilihan semulajadi mempunyai pengaruh yang kurang dan kurang kepada manusia moden, iaitu kekuatan yang menghilangkan individu yang tidak disesuaikan daripada populasi, menjadikan mereka lebih cergas, kerana yang terakhir meninggalkan lebih banyak anak. "Ada pilihan positif dan negatif– menerangkan Alexey Kondrashov. – Pemilihan positif menguntungkan beberapa ciri baru yang berguna. Sebagai contoh, semua orang dalam populasi adalah putih, maka seorang mutan hitam muncul, sifat ini ternyata bermanfaat, dan selepas beberapa saat keturunan mutan hitam ini dapat membanjiri seluruh penduduk. Pemilihan negatif, sebaliknya, menyokong ciri-ciri lama dan umum. Semua putih, dan putih menjadi baik, tetapi mutasi telah berlaku dan hitam telah muncul, dan hitam buruk. Oleh itu, keturunan mutan ini tidak akan bertahan, dan gen "hitam" akan keluar dari populasi. Darwin terutamanya berminat dalam evolusi, iaitu perubahan perlahan, dan dia kebanyakannya berfikir dan menulis tentang pemilihan positif.Dan mengenai banyak idea negatif, Ivan Ivanovich Schmalhausen banyak berfikir."Pemilihan ini yang telah melemahkan manusia moden – gen tidak menguntungkan daripada penduduk tidak terbang, tetapi berkumpul. Pada peringkat konsep umum, ini telah menjadi jelas untuk masa yang lama, tetapi dalam beberapa tahun kebelakangan ini, terima kasih kepada perkembangan kaedah penyelidikan moden, data telah muncul yang membolehkan penilaian kuantitatif proses ini.

Kesilapan dalam jentera biomolekul

Mutasi sentiasa berlaku di DNA kita – perubahan. Untuk ini, tiada pendedahan radiasi atau mutagen kimia yang diperlukan – proses itu berjalan secara spontan. "Seperti yang dikatakan oleh Buddha, segala sesuatu yang terdiri daripada bahagian-bahagiannya dimusnahkan, – kata Kondrashov. "Sebelum dia pergi ke nirvana, dia mengumpulkan murid-muridnya dan mengucapkan empat kata ini. Digunakan untuk molekul biologi, Buddha adalah benar, sesungguhnya, ia terdiri daripada bahagian-bahagian dan boleh runtuh. Dan proses mutasi adalah manifestasi kecenderungan seluruh dunia material menjadi huru-hara."Mutasi tidak dapat dielakkan, kerana DNA adalah molekul yang sangat panjang (jumlah panjang semua molekul genom dalam sel manusia adalah kira-kira satu meter) satu nukleotida tebal – secara semula jadi, ia tidak boleh sempurna.

Terdapat tiga sumber mutasi utama. Yang pertama adalah kesilapan yang berlaku semasa replikasi – menggandakan molekul DNA. Pelakon utama dalam proses ini ialah enzim polimerase DNA. Setelah helix ganda DNA dibongkar menjadi dua helai berasingan, polimerase DNA menyambung setiap helai dan memasang sepasangnya, menggunakan helai lama sebagai matriks. Iaitu, jika dia melihat huruf A (adenine) pada benang lama, maka dia melampirkan huruf T (timina) ke benang baru. "Tetapi dalam kira-kira satu kes daripada 100 ribu, ia memasukkan huruf yang salah, – menerangkan Alexey Kondrashov. – Dan yang paling luar biasa adalah bahawa selepas dia menambah surat, dia segera cuba untuk merobeknya. Hasilnya adalah bahawa surat itu menyertai salah dengan kebarangkalian kira-kira 10-5dan jika huruf dilampirkan dengan salah, maka ia tidak akan dikoyakkan sama ada dengan kebarangkalian 10-5. Oleh itu, kebarangkalian mutasi adalah sekitar 10-10 surat untuk replikasi. Cuba menaip dan bersetuju bahawa polimerase DNA berfungsi dengan baik.“.

Walau bagaimanapun, ralat replikasi berlaku dengan kebarangkalian 1010 surat itu merupakan sumber utama mutasi. Sumber mutasi kedua adalah kesilapan pembaikan DNA.Pembaikan adalah pembaikan kerosakan, dan kerosakan adalah yang memecah struktur kimia molekul, jadi DNA merosot. Sebagai contoh, kita bercakap tentang memecahkan satu atau kedua-dua benang, menjahit benang bersama-sama bukan oleh ikatan hidrogen lemah, tetapi oleh ikatan kovalen, supaya mereka tidak boleh menyimpang, dan sebagainya "Dalam setiap sel manusia, beberapa ratus ribu kecederaan spontan berlaku setiap hari, – kata Kondrashov. – Dan mereka mesti diperbaiki, kerana jika tidak sel akan mati. Dan sekiranya beberapa jenis kesalahan berlaku akibat pembaikan, ia juga akan menjadi mutasi"Sumber mutasi ketiga adalah kesilapan semasa rekombinasi semasa meiosis – pembahagian sel pengurangan yang membawa kepada pembentukan sel diploid dengan set kromosom berganda, haploid, dengan satu set kromosom. Ini adalah peringkat pematangan sel germinal yang diperlukan, dan semasa rekombinasi, apabila kromosom ditukar dalam ketulan – kesalahan mungkin berlaku.

Apa dan berapa banyak

99% mutasi adalah penggantian nukleotida, kata Alexey Kondrashov, sebagai contoh, apabila cytosine (C) berubah kepada guanine (G). Ini adalah sumber polimorfisme nukleotida tunggal (polimorfisme tunggal-nukleotidaSNP). Di samping itu, mungkin terdapat beberapa dropouts pendek atau, sebaliknya, penyisipan pendek satu atau dua atau tiga nukleotida.Sekurang-kurangnya, peristiwa besar berlaku – kejatuhan atau penyisipan 100 atau lebih, kadang-kadang sehingga satu juta nukleotida, atau mengubah sekeping DNA melalui 180 °. Perlu difahami bahawa mutasi adalah jauh dari buruk. Ini adalah sumber variasi genetik, dan tanpa mutasi tidak akan ada evolusi, akibatnya semua kepelbagaian dunia hidup muncul.

Dengan kemunculan kaedah penjujukan, kos menentukan urutan nukleotida dalam genom penuh telah menurun secara mendadak. Dan terdapat peluang baru untuk mengkuantifikasi kadar kejadian mutasi. Jika sebelum ini, seperti yang dikenang oleh Kondrashov, dia terpaksa menghabiskan beberapa tahun dengan teliti mempelajari sayap Drosophila dan memilih mutan, kini mungkin untuk menyusun genotip ibu, ayah dan ibu kepada $ 300 dan membandingkannya. Akibatnya, semua mutasi baru yang berlaku semasa perubahan generasi akan dijumpai, yang bermaksud bahawa mereka telah timbul dalam sel-sel kelamin ibu bapa. Bagi manusia, kadar mutasi dalam genom manusia, sebagaimana yang dikira saintis, adalah kira-kira 10-8 setiap generasi setiap nukleotida.

Perangkap dalam genom

Semua orang berbeza di antara mereka dalam pelbagai ciri luaran dan dalaman. Dan genetik dua individu manusia berbeza dalam satu huruf kod genetik untuk setiap 1000 nukleotida. Satu perbezaan per 1000 tidak banyak, memandangkan, misalnya, lalat buah mempunyai satu perbezaan per 100, dan schizophilum dalam cendawan – satu perbezaan setiap 10, dan ini kini merupakan rekod mutlak kepelbagaian genetik. Namun, ini bermakna banyak di antara dua individu manusia terdapat 35 juta kepelbagaian pendek, penggantian surat tunggal. Tetapi kerana setiap asid amino dikodkan oleh tiga nukleotida (triplet, atau kodon), tidak semua penggantian nukleotida dalam DNA membawa kepada penggantian asid amino dalam protein, tetapi hanya apa yang dipanggil tidak sinonim. Dan penggantian bukan sinonim itu, yang membawa kepada perubahan dalam molekul protein, setiap orang dalam gen pengkodan protein kira-kira 10 ribu. Kira-kira 10% daripada mereka tidak berguna, tetapi berbahaya, yang mengurangkan kecergasan. Antaranya adalah mematikan. Ahli biologi mendapati bahawa kedua-dua haiwan Drosophila dan vertebrata mempunyai purata satu atau dua mutasi maut setiap genotip. Organisma tidak mati kerana mutasi ini berada dalam keadaan heterosil, i.e.gen mutan ditiru oleh gen normal pada kromosom berpasangan. Di samping itu, genotip manusia secara purata membawa kira-kira 100 penambahan dan penyisipan besar dalam DNA, jumlah panjangnya kira-kira 3 juta nukleotida. Genotip pengarang Nobel, pengarang bersama model heliks ganda DNA James Watson, yang ternyata dalam urutannya, membawa mutasi mutasi yang sangat berbahaya dan 12 mutasi yang sangat berbahaya yang bersembunyi di belakang gen normal dalam keadaan heterozigot. Jelas sekali, mereka tidak menjejaskan kecergasan dan kejayaan James Watson. Tetapi jika terdapat mutasi yang lebih berbahaya dan mereka tidak akan dibersihkan dengan pemilihan, bakinya akan dipecah, dan kecergasan dalam populasi manusia tidak dapat dielakkan.

Sebagai Alexey Kondrashov menekankan, Darwin memahami masalah ini, yang menulis: "Dalam keganasan, mereka yang lemah, sama ada dalam badan atau fikiran, mati dengan cepat. Dan mereka yang bertahan biasanya menunjukkan kesihatan yang hebat. Dan kita, orang-orang beradab, melakukan yang terbaik untuk menghalang proses penghapusan ini: kita membuat tempat perlindungan untuk orang-orang yang cacat mental, orang kurang upaya dan yang sakit, mengeluarkan undang-undang yang menyokong golongan miskin, dan doktor kita berusaha sebaik mungkin untuk menyelamatkan nyawa setiap orang dengan peluang terakhir.Ada sebab untuk mempercayai bahawa vaksinasi telah menyelamatkan beratus-ratus nyawa yang akan mati akibat cacar. Oleh itu, walaupun anggota yang lemah dalam masyarakat bertamadun terus berkembang. Sesiapa yang berminat dengan haiwan peliharaan tidak akan ragu-ragu bahawa ia sangat berbahaya kepada penduduk manusia.“.

Model manusia di lalat

Menariknya, ternyata mungkin untuk mengesahkan dalam eksperimen. Eksperimen seperti – pada pengecualian pemilihan – Kondrashov dan rakan-rakannya ditubuhkan 15 tahun yang lalu. Mereka memodelkan keadaan hidup orang moden pada lalat drosophila. Pasangan lalat – lelaki dan perempuan – diletakkan di "pangsapuri" berasingan – tiub ujian, di mana mereka tidak bersaing untuk makanan dengan lalat lain, seperti yang berlaku dengan penempatan semula "komunal". Pasangan mendapat anak, dan ahli biologi telah mengehadkan bilangan telur untuk menghapuskan persaingan antara larva. Dari setiap "keluarga" lalat, lelaki muda dan perempuan diambil, dicampur dan dicampur dalam "apartmen berasingan" yang baru. Pengecualian pemilihan dinyatakan dalam ketiadaan persaingan dan pada hakikatnya setiap pasangan, tanpa mengira genotipnya, membawa jumlah keturunan yang sama. Dan selama 30 generasi.Setiap 10 generasi, saintis menilai kecergasan larva – daya saing mereka untuk makanan dalam keadaan yang teruk. Hasilnya – semasa eksperimen (lebih daripada 30 generasi), kecergasan larva lebih dari dua kali ganda. Dan dalam satu generasi, penyelidik mengira, ia jatuh sebanyak 2%. Alexey Kondrashov percaya bahawa dalam alam semula jadi ia akan menurun lebih banyak daripada di makmal. "Saya ingin mengulangi percubaan ini dan meregangkannya untuk sekurang-kurangnya 100 generasi, kerana terdapat hipotesis bahawa selepas 100 generasi semua lalat akan mati“.

Diharapkan pada masa akan datang, para saintis dapat melihat langsung apa yang berlaku dengan genom manusia. Apabila projek "1000 genom" selesai, mereka akan mempunyai 1000 genom individu genom (genotip) yang sempurna di tangan mereka, yang boleh dibandingkan dengan mutasi. Dan dalam sepuluh tahun genom ini akan menjadi satu juta. "Pilihan negatif diagihkan oleh beberapa pesanan magnitud lebih daripada positif. Oleh itu, sebab selepas beberapa waktu, kerana pemilihan positif, kita akan mempunyai kepala yang besar dan tangan yang kecil dan kita semua akan menjadi sangat pandai, dan sebagainya, semuanya adalah fiksyen sains", – Alexey Kondrashov menyatakan, tetapi apa yang akan berlaku kepada kesihatan kita adalah satu soalan. Walau bagaimanapun, dalam sepuluh tahun akan mungkin untuk menjawabnya dengan lebih tepat, kerana kita boleh mengukur perubahan yang berlaku dalam populasi manusia.

Mengenai risiko bapa lewat

Kami mengulangi bahawa kadar mutasi dalam seseorang, seperti dikira oleh genetik, adalah kira-kira 10-8 setiap generasi setiap nukleotida. Tetapi menarik bahawa lelaki dan wanita membuat sumbangan yang berbeza terhadap mutasi anak-anak mereka. Yakni, kanak-kanak itu menerima beberapa kali lebih banyak mutasi daripada bapa daripada ibu. Yang pertama menunjukkan perbezaan ini ialah ahli genetik Inggeris John Burdon Sanderson Huldain (John burdon sanderson haldane), salah seorang pencipta teori sintetik evolusi. Dia menyelidiki genetik hemofilia – penyakit keturunan, dinyatakan dalam pembekuan darah. Telah diketahui bahawa gen yang bertanggungjawab untuk hemofilia adalah pada kromosom X. Oleh itu, wanita yang membawa kromosom X yang cacat dalam gen ini tidak mengalami hemofilia, kerana ia memberi pampasan dengan gen biasa pada kromosom X berpasangan, tetapi kromosom X mereka dipindahkan bersama-sama dengan penyakit kepada anak-anak lelaki. Tetapi persoalannya adalah dimana mutasi ini timbul,dalam sel seks wanita atau lelaki? Haldane menganggap kedua-dua varian dan, membandingkan kemungkinan mereka, dia sampai pada kesimpulan bahawa majoriti mutasi dalam hemofilia berlaku di sel-sel kuman lelaki. Seorang pembawa wanita menerima mutasi ini dari bapanya dan menghantarnya kepada anaknya, yang sakit.

Kemudian, penyelidik menganalisis beberapa penyakit keturunan yang dikaitkan dengan gen X-chromosomal, seperti pelbagai neoplasia endokrin, acrocephalosindactyly. Dan ternyata dalam kebanyakan kes, mutasi pertama muncul dalam kromosom X lelaki. Seperti yang ditulis James Crow (artikel James F. Crow, dalam artikel PNAS, 1997), dalam primata yang lebih tinggi, termasuk manusia, terdapat purata lima kali mutasi lelaki berbanding mutasi wanita.

Sebab-sebab kesenjangan ini ialah sel-sel kuman lelaki dan wanita dibentuk secara berbeza. Para pendahulu telur menjalani pembahagian sel biasa (mitosis) hanya dalam tempoh embrio. Seorang gadis dilahirkan dengan set oosit yang belum matang (oosit-ordo dari urutan pertama), yang pada permulaan akil balighnya, selalunya memasuki bahagian pengurangan, meiosis, dan bentuk telur (oosit-bait kedua).Yang terdahulu spermatozoa – spermatogonia – secara aktif membahagi secara meyotis dalam testis dari akil baligh hingga tua. Hasilnya, telur melewati 25 mitos, yang mencapai puncak dalam meiosis, dan jumlah mitos di mana sperma berlalu sebelum meiosis bergantung pada usia lelaki itu: jika dia berusia 18 tahun, ia adalah kira-kira 100 mitos, dan jika dia berusia 50 tahun, maka kira-kira 800 mitos. Dan bahagian-bahagian sel yang lebih banyak, semakin banyak replikasi DNA, semakin banyak mutasi.

Daripada jumlah ini, bilangan mutasi yang diterima seorang anak dari seorang bapa sebahagian besarnya dipengaruhi oleh umur ayahnya. Kesimpulan ini bukan baru. Seperti yang dijelaskan Alexey Kondrashov, Wilhelm Weinberg pertama kali datang kepadanya (Wilhelm weinberg), seorang doktor Jerman, salah seorang penemu undang-undang dasar genetik penduduk (undang-undang Hardy-Weinberg). Tetapi kini corak ini dapat disahkan oleh penyelidikan langsung, kerana ia menjadi mungkin untuk menjejaki genom dan mengira bilangan mutasi. Pada bulan Ogos 2012 di Alam menerbitkan artikel oleh saintis Iceland (penulis pertama – Augustine Kong (Augustine Kong)), yang menggambarkan keputusan analisis genom penuh 78 keluarga. Setiap keluarga menjejaki genom bapa, ibu dan anak. Dan, membandingkan mereka di antara mereka sendiri, mereka mengira berapa mutasi baru yang diperoleh anak itu.Ternyata kanak-kanak menerima purata 15 mutasi dari ibu, tanpa mengira umurnya. Dan dari bapa – bergantung kepada umur: jika bapa berusia 20 tahun – 25 mutasi, jika berusia 40 tahun – 65, dan jika 50 tahun – 85 mutasi. Iaitu, setiap tahun kehidupan bapa menambah dua mutasi baru kepada kanak-kanak itu. Kesimpulan dari pengarang kerja: lelaki menunda kelahiran seorang anak sampai terlambat harus menimbang kembali rencana hidup mereka. Dan sekarang di dunia terdapat kecenderungan seorang bapa kemudian. Jika pada tahun 2004 purata umur bapa adalah 35 tahun, pada tahun 2007 ia sudah mencapai 40 tahun. Hampir setiap sepuluh bayi yang baru dilahirkan berusia lebih dari 50 tahun.

Semakin mutasi, lebih berbahaya di kalangan mereka, yang berkaitan dengan penyakit. Dalam beberapa kajian, data telah diperolehi bahawa kemudian ayah mengancam kanak-kanak dengan risiko penyakit neurologi dan mental. Oleh itu, menurut data yang diperolehi di Institut Otak di Queensland, kanak-kanak bapa berusia 50 tahun adalah dua kali lebih mungkin mengalami skizofrenia dan autisme daripada kanak-kanak bapa berusia 20 tahun. Dalam percubaan pada tikus, saintis telah menunjukkan bahawa keturunan lelaki tua telah bermutasi gen yang dikaitkan dengan skizofrenia dan autisme pada manusia. Dan menurut penyelidik dari Tel Aviv University, bapa berusia 55 tahun ke atas adalah lima kali lebih mungkin mempunyai anak dengan sindrom Down,risiko psikosis manik-depresi pada kanak-kanak meningkat sebanyak 37%, dan setiap 10 tahun berikutnya risiko skizofrenia dalam kanak-kanak meningkat sebanyak 30%. Dalam satu kertas yang diterbitkan tiga tahun yang lalu di Alam semula jadi, menunjukkan graf prestasi kognitif kanak-kanak terhadap umur ibu bapa. Ternyata terlalu muda seorang ibu tidak diinginkan untuk akal kanak-kanak – sehingga 20 tahun, dan kemudian pada usianya hampir tidak mempengaruhi tahap ini. Tetapi dengan umur bapa, prestasi kognitif kanak-kanak turun: jika bapa berusia 60 tahun, maka perkembangan mental yang diharapkan kanak-kanak itu adalah 5% lebih rendah daripada seorang bapa berusia 20 tahun. Hasilnya boleh dipercayai, kerana ia diperolehi dalam sampel yang sangat besar – lebih dari 30 ribu kanak-kanak. Bapa tua memberi anak kepada 60 mutasi tambahan, berbanding dengan anak muda, menyatakan Kondrashov. Dan ia mengurangkan kebolehan intelektual sebanyak kira-kira 5%. Nampaknya sedikit, tetapi bagi penduduk keseluruhannya, kecacatan kecil biasa jauh lebih buruk daripada besar, tetapi kecacatan jarang. Tidak ada pemilihan terhadap mutasi yang lemah pada manusia, tetapi mereka tidak menjejaskan bilangan anak. Dan akibatnya, mereka berkumpul dalam populasi.

Persoalannya timbul: bagaimana dengan sindrom Down – akibat kromosom tambahan – kebarangkalian, seperti yang kita ketahui, meningkat dengan usia ibu? Rupa-rupanya, ini kerana ketidakhadiran kromosom berlaku semasa bahagian terakhir meiosis, Jawapan Aleksey Kondrashov. Ingatlah bahawa pembahagian ini sudah wujud dalam badan dewasa seorang wanita. Tetapi ia boleh berlaku dalam spermatozoon, dan ia adalah fakta bahawa sejumlah sindrom Down tidak muncul dari ibu, tetapi dari bapa: "Artikel yang diterbitkan baru-baru ini mengambil 90 spermatozoa individu dan mengurutkannya, dua dari mereka ternyata aneuploid – mereka membawa kromosom tambahan. Jadi semua ini berlaku sepanjang masa, hanya kita tidak melihatnya, kerana sel-sel sperma biasanya mati pada tahap awal."

Jadi apa yang perlu dilakukan?

Bagaimana menangani masalah ini adalah soalan yang sukar, terutamanya kerana ia mempengaruhi isu-isu etika. "Saya pada dasarnya tidak mahu memberikan sebarang cadangan, kerana dalam perkara etika, saintis tidak mempunyai pengetahuan khusus – kata Profesor Kondrashov. – Saya tahu fakta-fakta, dan apa yang baik, apa yang buruk, saya tahu atau tidak tahu seberapa banyak orang lain. " Menerapkan pemilihan buatan kepada orang adalah fasisme, dan pensterilan paksa kira-kira 400 ribu orang di Nazi Jerman diiktiraf sebagai kejahatan terhadap kemanusiaan. Satu lagi perkara ialah kaunseling genetik, yang akan membolehkan anda mengelakkan daripada mempunyai anak dengan penyakit keturunan, walaupun hari ini hanya yang paling sukar dari mereka dapat dipotong dengan cara ini. Di masa depan, kemungkinan semua perkara akan diketahui tentang anak itu, termasuk kecerdasan dan jangka hayatnya.

Mungkin, Kondrashov percaya, kita akan belajar untuk "membersihkan" genom dari mutasi yang berbahaya, kembali ke "keadaan ideal": "Sekarang ia kelihatan seperti fantasi, tetapi 50 tahun yang lalu dan urutan untuk dua ribu ringgit kelihatan hebat." Menurutnya, manusia akan menghadapi masalah ini dalam masa terdekat dan akan dipaksa untuk menyelesaikannya. Dalam masa yang sama, sekurang-kurangnya anda boleh menyelamatkan anak anda daripada risiko terlambat – lelaki boleh membekukan sperma mereka pada usia yang muda, sehingga kemudian mereka dapat menggunakannya apabila diperlukan. Dan sepanjang hidup menjadi bapa "selama-lamanya muda".


Like this post? Please share to your friends:
Tinggalkan Balasan

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: